服务简介:
荧光定量PCR(Real-time qPCR)就是在PCR体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积,实时监测整个PCR进程,并通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。Real-time qPCR由于其操作简便,灵敏度高,重复性好等优点发展非常迅速。现在已经广泛应用于生命科学研究的各个领域,如基因的差异表达分析,SNP检测,等位基因的检测,药物开发,临床诊断,转基因研究等。

原理:
Taqman/MGB探针:
该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团,完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收,PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,释放出荧光信号。


SYBR Green:
SYBR Green是一种DNA结合染料,能非特异地掺入到双链DNA中去。在游离状态下,它不发出荧光,但一旦结合到双链DNA中以后,便可以发出荧光。在PCR反应过程中,随着循环的增加,双链DNA量增加,相应的SYBR Green荧光值增加,由此指示PCR反应运行过程。


UNG酶防污染:
UNG酶能选择性水解断裂含有dU的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键, PCR实验中最重要的污染物是PCR产物,为防止污染,以dUTP代替常规PCR反应体系中的dTTP,生成含有dUTP的DNA扩增产物,在下一PCR开始前增加50℃的保温步骤,UNG酶即可将反应体系中已有的U-DNA污染物降解,从而保证扩增结果的特异性,准确性,随后UNG酶在变性温度下被灭活。

项目服务:
基因突变:
SNP位点突变检测、基因缺失、基因重复。



绝对定量:
食品安全、病原微生物(真菌、细菌、病毒)拷贝数检测、基因拷贝数检测、等位基因检测。


相对定量:
相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例,而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数,主要适用于基因表达量变化的检测。
* 双标准曲线法。
* △△Ct法。


服务流程:


报告形式:
* 实验方案
* 引物探针序列
* DNA质量检测(凝胶电泳、OD值)
* 引物探针特异性验证(凝胶电泳检测、测序)
* 溶解曲线
* 标准曲线
* 原始数据及相关图表
* 结果分析

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