根据基因序列,设计筛选特异性结合特定基因型的扩增引物,其中不用基因引物分别标记生物素基团、地高辛基团、FITC,当样本中存在与引物特异性结合的基因,扩增反应发生,产生大量带有生物素(地高辛)和FITC结合的扩增片段,扩增产物与包被有FITC抗体的胶体金进行结合,形成偶联体,带生物素标记产物与T1线结合显色,带地高辛标记产物与T2线结合显色,根据显色结果判读个体基因型。横向流动试纸条能够以便利的免仪器方式进行检测,在某些环境中可能是一个不错的选择。

原理:

在PCR过程中,将PCR引物5’端标记生物素或者地高辛基团,同时设定FITC标记的探针,在进行PCR扩增时,如果样本中含有目的片段,将会产生大量的生物素或者地高辛标记的PCR产物,生物素或者地高辛标记的PCR产物与FITC标记的特异探针杂交、FITC标记的特异探针与抗FITC抗体的金标物结合后,将产生生物素-FITC-抗FITC抗体或者地高辛-FITC-FITC抗体偶合物,将该偶合物滴加到试纸条上,通过层析膜扩散,扩散到检测线时,生物素标记的扩增产物被生物素配体捕获,形成具有颜色的检测线,地高辛标记的扩增产物被地高辛抗体捕获,形成具有颜色的检测线。不被捕获的免疫复合物继续扩散到质控线被特异性抗体所捕获,形成具有颜色的质控线。


特性:
1、特异性高:只检测特定的PCR产物,特异性好;
2、灵敏度高:检测灵敏度高,下限为5pg DNA;
3、使用简单:无须繁杂的胶体制备过程,整个过程无毒,不需要专门的检测仪器;
4、检测时间短:5-15 min就能目测结果,肉眼判读;

产品适用于分子生物学实验室、临床实验、动植物检疫以及进出口检疫等领域,可在各种基因扩增方法后独立检测(PCR,LAMP等)。

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